期刊简介
本刊从妇女儿童出发，主要报道国外有关妇幼卫生保健的新理论、新进展、新成就、新技术、新动向，为妇幼卫生教学、科研、临床提供国外信息。
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首页>中国妇幼健康研究杂志
- 杂志名称：中国妇幼健康研究杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：西安交通大学,中国疾病控制中心妇幼保健中心
- 国际刊号：1673-5293
- 国内刊号：61-1448/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：陕西省2000年科技期刊一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 维普收录(中)
抗EGFR/VEGF双特异性单链抗体的构建及其抗卵巢癌SKOV-3的研究
江红；毛小刚
关键词：表皮生长因子受体, 人类表皮生长因子, 卵巢癌, 双特异性单链抗体
摘要：目的 将表皮生长因子受体(EGFR)和血管内皮生长因子(VEGF)同时进行靶向治疗,可协同抑制作用,增强抗肿瘤效果.方法 使用重叠聚合酶链式反应(PCR)手段,西妥昔单抗的可变区和贝伐珠单抗的可变区通过G4S柔性肽连接在一起,获得同时靶向EGFR和VEGF的双特异性单链抗体(scDb);通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测scDb与EGFR和VEGF的结合活性,并计算亲和力常数;流式细胞术检测scDb对受体过表达的卵巢癌细胞系SKOV-3的结合能力;MTT法检测scDb对卵巢癌细胞系SKOV-3的增殖抑制;Western Blot研究与单独给药相比 scDb对 SKOV-3相关信号通路的影响;建立卵巢癌SKOV-3细胞荷瘤小鼠动物模型,检测scDb的体内抗肿瘤活性.结果 通过重叠PCR手段和毕赤酵母X-33表达,成功获得scDb,经Western blot鉴定验证了scDb的分子量为55kD,证明表达及装配正确.ELISA检测scDb与EGFR和VEGF均有结合活性,通过EC50计算,得到scDb与EGFR的亲和力常数为1.27nM,与VEGF的亲和力常数为0.75nM.流式细胞术检测scDb与SKOV-3的结合率为72.00%.MTT实验,亲本抗体组与双特异性单链抗体组对SKOV-3均有抑制作用.通过Western blot实验表明,scDb能同时阻断EGFR和激酶结构域受体(KDR)的磷酸化,终导致丝氨酸/苏氨酸激酶等信号通路被强烈抑制.通过SKOV-3细胞裸鼠移植瘤模型的体内抗肿瘤实验,scDb组在体内仍能发挥较强的抗肿瘤效果,高剂量组肿瘤抑制率可以达到(74.53±9.63)%.结论 该文成功构建并表达了scDb.scDb具有良好的体内外抗肿瘤活性,为抗肿瘤治疗提供了新的思路,有潜在的临床应用前景.
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